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可見(jiàn)分光光度計的原理及常見(jiàn)用途說(shuō)明

更新時(shí)間:2022-03-22 點(diǎn)擊次數:1731
   可見(jiàn)分光光度計已經(jīng)成為現代分子生物實(shí)驗室常規儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長(cháng)濃度的定量。測量范圍一般包括波長(cháng)范圍為380~780nm的可見(jiàn)光區和波長(cháng)范圍為200~380nm的紫外光區。
  
  一、工作原理:
  分光光度計采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(cháng)的光源,通過(guò)系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長(cháng)的光源,光線(xiàn)透過(guò)測試的樣品后,部分光線(xiàn)被吸收。樣品對光的選擇性吸收波長(cháng),以及相應的吸收系數是該樣品的物理常數。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區,除某些物質(zhì)對光有吸收外,很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測定,故又稱(chēng)比色分析。
  
  二、設備常見(jiàn)用途:
  可見(jiàn)分光光度計是在可見(jiàn)光區域內對物質(zhì)做定性、定量分析。常見(jiàn)的用途有以下幾種:
  (1)比色法蛋白質(zhì)定量
  比色法的測定原理是組成蛋白質(zhì)的氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應的氨基酸數目直接相關(guān),從而反應蛋白質(zhì)濃度。
  
  (2)核酸的定量
  核酸的定量是分光光度計使用頻率最高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。定量不同類(lèi)型的核酸,事先要選擇對應的系數。測試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。
  
  (3)OD600細菌細胞密度
  實(shí)驗室確定細菌生長(cháng)密度和生長(cháng)期,多根據經(jīng)驗和目測推斷細菌的生長(cháng)密度。在遇到要求較高的實(shí)驗,需要采用分光光度計準確測定細菌細胞密度。OD600是追蹤液體培養物中微生物生長(cháng)的標準方法。

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